Hjælp udviklingen af ​​webstedet med at dele artiklen med venner!

PCR er en test, der er blevet brugt til diagnosticering af mange sygdomme. PCR-metoden gør det muligt at vise den direkte tilstedeværelse af bakterier i organismen, og specifikt dens DNA. PCR anvendes bl.a ved diagnosticering af borreliose. Hvad er PCR-teknikken? Hvad er re altids PCR?

Indhold:

  1. PCR (test) - hvad er PCR-teknikken?
  2. PCR (test) - anvendelse af PCR-metoden
  3. PCR (test) - Lyme sygdom
  4. PCR (test) - resultater. Kan de være falske positive?
  5. PCR (test) - resultater. Kan de være falsk-negative

PCR(polymerasekædereaktion) er den primære metode, der bruges i genetiske og molekylære laboratorier. Det blev udviklet i 1983 af Kara Mullis, som blev tildelt Nobelprisen for det i 1993.

PCR (test) - hvad er PCR-teknikken?

PCR-testbestår i multipel amplifikation (sædvanligvis i 30-40 cyklusser) af et specifikt fragment af DNA, fx gener, der koder for Borrelia-proteiner, med brug af polymerase-enzymet.

Derefter, for at visualisere det amplificerede DNA-fragment, bruges specielle molekylære farvestoffer. PCR, takket være amplifikationen af ​​specifikke DNA-fragmenter, er en ultrafølsom metode

I PCR-metoden amplificeres DNA-fragmenter ved hjælp af specifikke primerpar for en given region af det bakterielle DNA. For eksempel er PCR-målregioner, der anvendes til diagnosticering af Lyme-sygdom, gener, der koder for proteiner, f.eks. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.

Det biologiske materiale, hvorfra testen kan udføres, er:

  • blod
  • hudafsnit fra migrerende erytem
  • cerebrospinalvæske
  • synovial- eller bruskvæske
  • urin

PCR (test) - anvendelse af PCR-metoden

Ud over diagnosen Lyme-borreliose kan PCR-metoden påvise specifikke DNA-fragmenter fra andre mikroorganismer eller mennesker. Derfor bruges PCR-metoden også i:

  • diagnose og overvågning af virale infektioner: herpesvirus (herpesvirus, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitisvirus (HBV og HCV)
  • diagnose og overvågning af bakterielle infektioner, især de bakterier,som ikke kan identificeres gennem kulturer, fx tuberkulose
  • diagnose og overvågning af neoplastiske sygdomme: leukæmi, brystkræft, tyktarmskræft, lungekræft
  • diagnose af kræftdisposition: bryst- og ovariecancer (BRCA1- og BRCA2-gener), kolorektal cancer (APC- og CHEK2-gener)
  • diagnose af genetiske sygdomme: hæmokromatose (HFE-gen), thalassæmi (HBA1- og HBA2-gener), cøliaki (HLA-gener)
  • faderskabstest, som påviser barnets og farens DNA-kompatibilitet
Værd at vide

I øjeblikket er der mange modifikationer til PCR-metoden. Ved diagnosticering af borreliose anvendes f.eks. metoderne Nested PCR (nested PCR) og real-time PCR ( ) hovedsageligt. Sidstnævnte er en kvantitativ metode og gør det muligt at bestemme det nøjagtige antal Borrelia DNA-kopier i det testede biologiske materiale

PCR (test) og borreliose

Grundlaget for diagnosen af ​​borreliose er serologisk testning. Der er dog kliniske situationer, der kan få disse test til at være falsk-negative:

  • serologisk vindue, dvs. den indledende periode med infektion, hvor kroppen endnu ikke producerer specifikke IgM- og IgG-antistoffer mod Borrelia
  • hos immunkompromitterede mennesker, der ikke producerer nok antistoffer
  • tilstedeværelse af immunkomplekser, der består af Borrelia-antigener og specifikke antistoffer for dem og forhindrer påvisning af antistoffer ved serologiske metoder

Hvis patienten mistænkes for at have symptomer på borreliose, og de serologiske testresultater er negative, kan der udføres en molekylær test baseret på PCR-metoden

DNA fra Borrelia-spiroketter kan påvises i de tidlige stadier af infektion, da antallet af spiroketter i kropsvæsker da er det højeste.

Ved diagnosticering af Lyme-borreliose bruges serologiske metoder såsom ELISA primært, men i nogle kliniske situationer er genetisk testning ved hjælp af PCR-metoden nyttig.

Jo længere tid der går fra infektion, jo lavere er sandsynligheden for at opdage bakterielt DNA. Derfor, i nogle tilfælde, før PCR-testen udføres, dyrkes bakterier på specielle medier i 1-2 uger, og derefter udføres testen

Denne fremgangsmåde bruges i tilfælde af mistanke om Lyme Lyme-sygdom og høstet cerebrospinalvæske. I den sene fase af infektionen er det mere hensigtsmæssigt at udføre en ELISA-test

PCR-metoden bør ikke bruges i rutinediagnostik af borreliose på grund af manglende standardiseringvedrørende forekomsten af ​​Borrelia burgdorferi-sorter i Polen

Men i tilfælde af vanskeligheder med diagnosticering (især i det tidlige stadie af sygdommen), er resultatet af PCR-testen nyttigt i den diagnostiske proces.

Et positivt testresultat betyder, at tilstedeværelsen af ​​Borrelia burgdorferi DNA og dets varianter blev påvist i det testede materiale, men det forklarer ikke, om organismen er aktivt inficeret. På den anden side udelukker et negativt resultat ikke tilstedeværelsen af ​​bakterier i kroppen

Nogle laboratorier tilbyder testning for tilstedeværelsen af ​​Borrelia DNA i skovflåten. Resultatet af en sådan test er imidlertid ikke grundlaget for diagnosen borreliose hos en bidt person.

PCR - resultater. Kan de være falske positive?

PCR er en ultrafølsom metode og samtidig meget følsom over for kontaminering. Derfor er det meget vigtigt i PCR-baseret testning at vælge en passende intern kontrol for at udelukke falsk-positive resultater

Korrekt indsamling af materiale til tests samt erfaring og pålidelighed hos den diagnostiker, der udfører testen, er også af afgørende betydning.

PCR - resultater. Kan de være falsk-negative

Som i enhver laboratorietest, også i PCR-metoden, kan der forekomme falsk negative resultater. Her er det afgørende at indsamle blod til et passende antikoagulant, da nogle af dem, såsom heparin, kan hæmme PCR-reaktionen

Indsamling af materiale efter start af antibiotikabehandling kan mindske effektiviteten af ​​PCR-reaktionen og øge sandsynligheden for falsk-negative resultater

Det skal også huskes, at Borrelia-bakterier lever meget kort tid i blodet og kropsvæsker, fordi de takket være specielle receptorer trænger meget hurtigt ind på "svært tilgængelige" steder i kroppen.

Derfor, i modsætning til diagnostik af andre mikroorganismer, er antallet af Borrelia-spiroketter i biologisk materiale lille, nogle gange endda ved grænsen for detektion af PCR-metoden. Dette kan også forårsage en falsk negativ.

Referencer

  1. Dunaj J. et al. PCR-metodens betydning i diagnosticeringen af ​​Lyme-borreliose. Gennemse Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
  2. Laboratoriediagnostik af flåtbårne sygdomme Arbejdsgruppens anbefalinger: National Chamber of Laboratory Diagnostics, National Institute of Public He alth-National Institute of Hygiene, National Consultant in the field of infektionssygdomme, Department of Infectious Diseases and Neuroinfections , Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014.
  3. Ružić-Sabljić E. og Cerar T. Fremskridt i den molekylære diagnose af Lyme-sygdom. Ekspert Rev Mol Diagn. 2022jan; 17 (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. et al. Principper og anvendelser af polymerasekædereaktion i medicinske diagnostiske områder: en gennemgang. Braz J Microbiol. 2009 Jan-Mar; 40 (1): 1-11.
Om forfatterenKarolina Karabin, MD, PhD, molekylærbiolog, laboratoriediagnotiker, Cambridge Diagnostics Polska Biolog af profession med speciale i mikrobiologi og laboratoriediagnotiker med over 10 års erfaring i laboratoriearbejde. Uddannet fra College of Molecular Medicine og medlem af Polish Society of Human Genetics Leder af forskningsbevillinger ved Laboratory of Molecular Diagnostics ved afdelingen for hæmatologi, onkologi og indre sygdomme ved Warszawas medicinske universitet. Hun forsvarede titlen som doktor i medicinske videnskaber inden for medicinsk biologi ved det 1. Medicinske Fakultet ved det medicinske universitet i Warszawa. Forfatter til mange videnskabelige og populærvidenskabelige værker inden for laboratoriediagnostik, molekylærbiologi og ernæring. Til daglig driver han, som specialist inden for laboratoriediagnostik, indholdsafdelingen hos Cambridge Diagnostics Polska og samarbejder med et team af ernæringseksperter på CD Dietary Clinic. Han deler sin praktiske viden om diagnostik og diætterapi af sygdomme med specialister på konferencer, træningssessioner og i magasiner og hjemmesider. Hun er især interesseret i den moderne livsstils indflydelse på molekylære processer i kroppen.

Hjælp udviklingen af ​​webstedet med at dele artiklen med venner!

Kategori:

Forskning