ELISA-testen detekterer adskillige sygdomme, hvorfor den er blevet meget brugt i medicin og mere. ELISA-testen er dog bedst kendt for sin diagnose af Lyme-sygdom. Hvad er ELISA-testen? Hvordan tolker man resultaterne? Hvad er prisen for testen?

Indhold:

  1. ELISA-test - hvad detekterer den? Brug af ELISA
  2. ELISA-test - hvad er testen?
  3. ELISA-test og borreliose - hvornår skal man udføre?
  4. ELISA-test - pris. Hvor meget koster en ELISA-test?
  5. ELISA-test - resultater. Kan de være falske positive?
  6. ELISA-test - resultater. Kan de være falsk negative?

ELISA-test , det vil sige den enzymbundne immunosorbentanalyse, er en almindeligt anvendt laboratoriemetode, der tjener bl.a. til kvantitativ påvisning af antistoffer i blodet

På grund af denneELISA-testfundetanvendelsei diagnosticering af bakterielle sygdomme, såsomLyme-sygdom med Lyme.

Fordelen ved ELISA-metoden er dens enkelhed, hurtige udførelse og høje følsomhed. ELISA-metoden udføres ved hjælp af specielle plastikplader med brønde fyldt med fx Borrelia-proteiner (antigener) og specifikke monoklonale antistoffer, som er designet til at påvise antistoffer i patientens prøve.

ELISA-test - hvad detekterer den? Brug af ELISA

Den høje følsomhed og enkelhed af ELISA-metoden gjorde den anvendelig til diagnosticering af mange sygdomme, men den er bedst kendt som den diagnostiske metode for borreliose.

I diagnosen Lyme borreliosis, den såkaldte indirekte ELISA, som gør det muligt at påvise specifikt IgM eller IgG i det testede materiale. På samme måde kan antistoffer påvises til diagnostiske formål:

  • virale infektioner: herpesvirus (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitisvirus (HBV og HCV)
  • protozoinfektioner: toxoplasmose, giardiasis
  • autoimmune sygdomme: cøliaki (anti-tTG eller anti-DPG antistoffer), Hashimotos sygdom (anti-TG og anti-TPO antistoffer), inflammatoriske tarmsygdomme (anti-ASCA og anti-ANCA antistoffer)
  • parasitære sygdomme og allergier,hvor specifikke IgE-antistoffer påvises. Deres øgede niveau kan indikere tilstedeværelsen af ​​allergier, fx over for pollen og mad, eller parasitære invasioner (bevæbnet bændelorm, menneskelig rundorm)

Der er også modifikationer af ELISA-metoden (såkaldt sandwich ELISA), som tillader påvisning af en testet prøve af andre proteiner end antistoffer. Derefter er målet med forskningen at påvise i det biologiske materiale:

  • fragmenter af vira eller bakterier, oftest er disse antigener specifikke for et givet patogen
  • serumhormoner, f.eks. østrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
  • enzymer, f.eks. calprotectin, pancreas elastase, alkalisk fosfatase
  • tumormarkører, f.eks. CA-125
  • tilstedeværelse af lægemidler i serumet

Denne metode bruges også i fødevareindustrien, hvor spormængder af allergener (f.eks. mælk, jordnødder), GMO'er eller toksiner i fødevarer kan påvises.

ELISA-test - hvad er denne test?

Diagnosen af ​​fx Lyme-borreliose ved hjælp af ELISA-metoden består i at påvise immunproteiner i biologisk materiale - antistoffer, der opstår under responsen mod Borrelia-antigener.

Antistoffer testes i to klasser, IgM og IgG. IgM'er er de første antistoffer, der opstår i kroppen ved kontakt med bakterier og aftager over tid.

Deres plads overtages af mere persistente IgG-antistoffer, der kan forblive i kroppen i flere dusin år.

På denne måde testes tilstedeværelsen af ​​bakterier i kroppen indirekte ved at detektere antistoffer specifikt rettet mod Borrelia-spirokæter.

Antistoffer på forskellige stadier af infektion kan være rettet mod en række forskellige Borrelia-proteiner. For eksempel er det på et tidligt tidspunkt p41-proteinet

I de senere stadier begynder flere og flere proteiner at dukke op, såsom p21, p30, p39, p43. Det er grunden til, at diagnosen Lyme-sygdom er ekstremt vanskelig.

Udvælgelsen af ​​bakterielle proteiner er ekstremt vigtigt for, at testen har en høj diagnostisk værdi. Derfor bør der rutinemæssigt anvendes II-generations- eller III-generations-ELISA-tests til diagnosticering af Lyme-sygdom, hvor proteinsættene udvælges for at opnå det mest pålidelige resultat.

ELISA-test og borreliose. Hvornår skal man optræde?

Lyme-borreliose er en bakteriel sygdom forårsaget af bakterien Borrelia burgdorferi og dens mange varianter.

Sygdomsdiagnose er ikke let på grund af kompleksiteten af ​​immunresponset mod Borrelia og ufuldkommenhederne i laboratoriemetoder

Den mest udbredte laboratoriemetode er den meget følsomme ELISA-metode, som detekterer specifikke antistoffer, der er rejst mod bakterielle proteiner.

Ved diagnosen af ​​Lyme-borreliose anvendes en indirekte ELISA-metode, hvor der skelnes mellem følgende stadier:

  • inkubation af brøndene på pladen med materiale opsamlet fra patienten, fx serum. Hvis der er antistoffer mod Borrelia i det testede materiale, binder de sig til proteiner i bunden af ​​reaktionsbrønden
  • derefter skylles det overskydende serum ud med en speciel vaskevæske (buffer) og den såkaldte konjugat, dvs. et antistof koblet til et enzym, der binder til tidligere koblede antistoffer i reaktionsbrøndene
  • Substrat for konjugatet tilføjes senere, og der er ingen (positiv) eller ingen farvereaktion (negativ)
  • det sidste trin er læserens aflæsning (spektrofotometer) af koncentrationen af ​​antistoffer mod Borrelia i patientens serum

ELISA-metoden for borreliose udføres med blod og i tilfælde af neurologiske symptomer (neuroborreliose) også med cerebrospinalvæsken

Synovialvæsken bør ikke testes, da der er stor sandsynlighed for falsk-positive resultater

Grundlaget for diagnosen af ​​sygdommen er kliniske symptomer, der indikerer den, bekræftet af resultaterne af laboratorieundersøgelser

Tilføjelsen af ​​et laboratorietestresultat uden tilstedeværelse af symptomer godkender ikke diagnosen borreliose, da det har vist sig, at antistoffer mod Borrelia-spirokæter også påvises hos raske mennesker.

Serologisk diagnose af Lyme-borreliose begynder med en semi-kvantitativ ELISA-screeningstest. Hvis resultatet er negativt, betyder det, at der ikke er fundet Borrelia-spiroketter, eller resultatet er falsk-negativt.

Hvis resultatet er positivt eller svagt positivt (tvetydigt), bekræftende Western blot-test, som er meget specifik.

Dette er for at bekræfte "sandheden" af resultaterne opnået med ELISA-metoden. Under diagnosticering kan du ikke springe nogen af ​​ovenstående trin over og for eksempel udføre diagnostik ved hjælp af Western blot-metoden eller stille en diagnose baseret på et positivt resultat udelukkende ved hjælp af ELISA-metoden.

I Polen slutter diagnosen af ​​Lyme-sygdom meget ofte i det første screeningsstadium, hvilket forårsager en fejlfortolkning af positive eller svagt positive resultater.

Værd at vide

ELISA-test - pris. Hvor meget koster en ELISA-test?

Testen koster omkring 60zloty og laves med det samme. Du kan dog vente omkring tre måneder på resultaterne af henvisningen

ELISA-test - resultater. Kan de være falske positive?

Falske positive resultater er resultatet af krydsreaktiviteten af ​​IgM-antistoffer med andre proteiner. Antistoffer produceret af kroppen kan "forkert" genkende et antigen fra andre mikroorganismer som Borrelia-antigenet.

De mest almindelige "fejl" forekommer hos mennesker, der er inficeret med treponema pallidum, herpesvirus og hos mennesker med systemisk lupus erythematosus og andre gigtsygdomme.

ELISA-test - resultater. Kan de være falsk negative?

Falsk negative resultater kan forekomme i det tidlige stadie af infektion, derefter bør testen gentages efter ca. 3-4 uger. Dette kaldes serologisk vindue, dvs. den indledende periode med infektion, hvor kroppen endnu ikke har "formået" at producere specifikke antistoffer.

Tilsvarende hos immunkompromitterede mennesker, som ikke danner nok antistoffer.

Et stort problem, især ved meget intense infektioner, er udseendet af den såkaldte immunkomplekser, der består af Borrelia spirochetes-antigener og specifikke antistoffer for dem.

Dette gør antistofferne "usynlige" for almindeligt anvendte metoder såsom ELISA, og selvom de er til stede i det testede materiale, kan de ikke påvises.

I sådanne tilfælde kan laboratoriet bruge nedbrydning af immunkomplekser. Denne behandling er designet til at frigive antistofferne. Denne metode er dog ikke udbredt på grund af manglen på standardisering i laboratorier.

Værd at vide

Hvorfor er det ikke let at diagnosticere borreliose?

Dette skyldes kompleksiteten af ​​immunresponset mod Borrelia og laboratoriemetodernes begrænsninger. Mangfoldigheden af ​​sorter og fremkomsten af ​​nye infektioner, der forårsager infektioner, især på det europæiske kontinent, letter ikke udviklingen af ​​effektive diagnostiske metoder

Flere varianter er for nylig dukket op i Europa, såsom Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana og Borrelia spielmanii. Derudover kan Borrelia-spirokæter i kroppen blive til cyster eller blive på steder i kroppen, der er utilgængelige for immunsystemets celler

At være "usynlig" for immunsystemet. Derudover har det vist sig, at vævene kan indeholde fragmenter af bakterier, der har stærkt pro-inflammatoriske egenskaber. De menes at være ansvarlige for de kroniske symptomer på borreliose, på trods af negative resultater i undersøgelsenlaboratorium.

Referencer

1. Witecka-Knysz E. et al. Lyme-sygdom: hvorfor er diagnose så vanskelig? Laboratoriediagnotiker april 2007.2. Moore A. et al. Nuværende retningslinjer, almindelige kliniske faldgruber og fremtidige retningslinjer for laboratoriediagnose af borreliose, USA. Emerg Infect Dis. juli 2016; 22 (7) .3. Laboratoriediagnostik af flåtbårne sygdomme Arbejdsgruppens anbefalinger: Nationalkammeret for Laboratoriediagnostikere, Statens Institut for Folkesundhed-National Institut for Hygiejne, Nationalkonsulent inden for infektionssygdomme, Institut for Infektionssygdomme og Neuroinfektioner, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) From A to Z. Springer 2022.

Om forfatterenKarolina Karabin, MD, PhD, molekylærbiolog, laboratoriediagnotiker, Cambridge Diagnostics Polska Biolog af profession med speciale i mikrobiologi og laboratoriediagnotiker med over 10 års erfaring i laboratoriearbejde. Uddannet fra College of Molecular Medicine og medlem af Polish Society of Human Genetics Leder af forskningsbevillinger ved Laboratory of Molecular Diagnostics ved afdelingen for hæmatologi, onkologi og indre sygdomme ved Warszawas medicinske universitet. Hun forsvarede titlen som doktor i medicinske videnskaber inden for medicinsk biologi ved det 1. Medicinske Fakultet ved det medicinske universitet i Warszawa. Forfatter til mange videnskabelige og populærvidenskabelige værker inden for laboratoriediagnostik, molekylærbiologi og ernæring. Til daglig driver han, som specialist inden for laboratoriediagnostik, indholdsafdelingen hos Cambridge Diagnostics Polska og samarbejder med et team af ernæringseksperter på CD Dietary Clinic. Han deler sin praktiske viden om diagnostik og diætterapi af sygdomme med specialister på konferencer, træningssessioner og i magasiner og hjemmesider. Hun er især interesseret i den moderne livsstils indflydelse på molekylære processer i kroppen.

Kategori:

Forskning